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海外医疗领域,蛋白质和多肽分离技术的发展

发布日期:2017-09-06

在过去10多年里,安德森癌症中心被美国新闻与世界报道,在癌症治疗和科研领域中排名全美位居前列,并且连续7年在美国癌症研究医院评比中排名第一,全美肿瘤专科医院之首。中心在肺癌、前列腺癌、卵巢癌、头颈部癌、肠癌、胰腺癌、黑色素瘤等治疗领域处于地位,大部分癌症的5年生存率到能达到80%以上。

安德森癌症中心每年收治美国和其他国家的住院患者19000余例,日门诊量1800人次。每年收治着来自世界各地的近10万多名患者,其中不乏各国政要、富商及精英等。中心为癌症患者提供的治疗包括靶向疗法、手术、化疗、放疗和质子疗法、免疫疗法以及多种疗法的联合治疗。跨学科的专家团队通过密切合作为患者制定佳的治疗方案,每年都有1100多位临床住院医生到安德森癌症中心接受癌症研究和治疗的专业培训。

海外医疗机构爱诺美康介绍到,对于SDS分离蛋白,它是蛋白质组学研究的基本策略,可以使蛋白质的三维空间结构变性,聚丙烯酰胺则作为分子筛,进一步分离具有不同分子质量的蛋白质。以蛋白质分子质量标准品的迁移条带为对照,可确定目的蛋白的分子质量。

海外医疗领域,蛋白质和多肽分离技术的发展

完成后需对胶条进行缓冲液系统的平衡,以维持每个氨基酸残基的氧化状态,然后进行SDS电泳。双向电泳结束后,通常需要对分离的蛋白或肽段进行显色处理。然而,由于凝胶本身的特性需对其进行固定以保持蛋白质在凝胶中的位置并防止蛋白质的弥散。凝胶染色方法包括考马斯亮蓝染色、银染、锌染、荧光蛋白染色及放射性检测等。

所有这些方法的选择,与应用取决于胶的厚度、蛋白斑点或条带的大小、可检测蛋白的丰度及其他可变因素。需要综合考虑每种染色剂的优缺点,根据染色后蛋白质的终用途,和研究者想获取的信息来选取相应的染色方法。

不管采用何种染色方法,2D凝胶图像都需要数字化处理以便进一步地分析。这是因为毎板胶上具有超过2000多个蛋白质斑点,加之有很多来自不同组织样本的胶均需要相互比较,即使训练有素的眼睛,也可能会错过关键蛋白斑点。成像系统有很多种,多数研究者采用同位素磷屏成像仪或者平板扫描仪。一旦对2D凝胶图像完成数字化处理,就可以利用软件构建一个标准直角坐标系,来比较蛋白斑点在二维空间的分布,并选择感兴趣的蛋白斑点做进一步分析。

质谱是蛋白质组学技术的奠基石。基本原理是待测分子经电离后,基于其自身的质荷比而彼此分离。终得到的信息可用于确定蛋白质的分子质量及结构。质谱技术的每种氨基酸具有不同的分子质量,从而使得肽链的分子质量各不相同。

研究者利用该原理可解析肽链,或蛋白质的氨基酸序列。质谱技术也有助于阐述蛋白质翻译后修饰、酶与底物结合以及抗原抗体/配体受体结合等蛋白复合物的形成。海外医疗研究中,常用的两种主要电离装置:电喷雾电离和基质辅助激光解吸,促进了蛋白质和多肽分离鉴定技术的发展,其特点是所需液体样品及电离滴的体积更小。

MALDI是一种利用激光照射促使固定在金属板上的样品,其优势是方便对样本进行再次分析。与之相比,ESI的一个优点是能分析较大的蛋白质。自2000年以来,无胶蛋白分离技术已广泛应用于蛋白质组学研究。

测定多肽的分子质量,可以通过蛋白质水解的方法,称为“自下而上”光谱。或直接对完整的蛋白进行测定称为“自上而下”光谱。海外医疗服务机构介绍,这两种方法并非相互排斥,事实上它们可以相互补充以获得完整的蛋白质图谱。将所有的多肽段与剩余的整个蛋白质,与数据库中的已知序列比对,终得到靶蛋白的详细信息。