酶谱的特点是无论是否有活性都被显示
发布日期：2017-06-30蛋白酶在合适的折叠状态下，比如前体MMP包括有“半胱氨酸-梓指键”，即半胱氨酸开关。将样品与含有SDS的缓冲液混合后，蛋白酶由于SDS带有大量负电荷而展开。去国外看病爱诺美康介绍，样品在聚合有明胶的聚丙烯酰胺凝胶中上样，电泳开始后蛋白质跑向阳极，随分子量大小而逐渐分开。
iv电泳后，胶上SDS被洗去，从而使得蛋白质在胶上的迁移位置重新折叠，但是半胱氨酸-锌指键无法恢复，即使原来前体MMP也被激活。（v)将胶放人含有Ca2+的反应缓冲液中，37T下孵育，水解反应发生。在反应液中加人EDTA则可以防止金属离子依赖的蛋白酶水解反应。（vi)胶经过考马斯亮蓝染色后，除了已经被MMP水解的区域，明胶会显示较深的颜色。条带的大小由分子量标记物决定，从而鉴定出MMP。右边的胶是经过EDTA孵育的,从而确认条带缺失是MMP。样本来自特定培养条件下增长期的HT1080纤维肉瘤细胞系，一般在酶谱法中用作阳性对照。
去国外看病爱诺美康介绍，有一点值得注意，酶谱的特点是无论蛋白酶是否有活性，都能被显示出来。跑胶时蛋白质发生解构，导致“半胱氨酸开关”被启动，MMP前体在前结构域水解裂解后被激活。激活后的蛋白酶，其分子量大小比相应的酶前体约小10 000。例如，对应MMP-9只有一条条带，而对应MMP-2有两条条带。MMP-9在分子量92 000处的条带，相当于无活性的或前体MMP-9,因此在所研究的该生物样品中尚未激活。
MMP-2的两条条带分别对应分子量72 000处的无活性的，或前体MMP-2以及分子量62 000处的活化MMP-2。该生物样品经分析后，只有活性的MMP-2能够发挥酶的功能。然而，应当记住，如果激活后的MMP-2分子处于有TIMP或人工合成的MMP抑制剂的环境下，则酶的活性会受到抑制。因为酶和抑制剂之间的相互作用主要是非共价键形式,复合体在电泳过程中解离后，酶才表现出活性。
去国外看病爱诺美康介绍，凝胶酶谱已成为确定MMPs存在的有效方法，不需要特异性抗体，但它仍有一些缺点。其一是这种识别是建立在多种孵育条件（中性pH值，金属离子）及分子大小的基础上。这并不是一个无懈可击的系统,需要用其他方法核实确认MMP的条带。另一个问题是，由于跑胶前必须将组织样品做均一化处理，一些局部信息会随之丢失。
因此，原位酶谱技术的研发就是为了提供发挥酶活性的局部组织信息。其简单的形式就是将底物覆盖到冰冻组织切片上，该底物作为一个可见的标记变化在原位显示出来。早期的底物包括感光乳剂，其中包含明胶。荧光基团标记的荧光底物常使用，如明胶或胶原蛋白。染料淬火是常用的方法，该方法中的蛋白质分子相邻的荧光基团浓度很高，可干扰荧光释放。但可提供寻找信号的优势——荧光释放，可以确认蛋白水解发生的区域。这些原位技术的主要缺点是缺乏特异性，因此具体是何种蛋白酶的活动，存在不确定性。
一些机构夸大去国外看病的难度与复杂性，宣传自己的所谓某些特有的“优势”，比如“有绿色通道、有内部关系”，采用信息屏蔽的方式蒙骗患者，事实上如果患者英语良好，完全可以自行申请，针对出国患者为头痛的与医生沟通时的翻译问题，美国大的医院大多配有免费的诊室翻译，患者并不需要担心。
去国外看病爱诺美康介绍，公司自成立以来，始终专注于为肿瘤、神经、心脏等严肃疾病患者提供全程无外包的完善服务。目前我们已经转诊了超过200种类型的癌症患者，约70%治疗方案被改变，很多患者获得了缓解，因此建议有条件的重大疾病的患者可以考虑出国，毕竟多一份选择就会多一份希望。
爱诺美康翻译部 • 译
