海外医疗：PCR是用来扩增特异DNA分子的手段
发布日期：2017-09-15作为欧洲好的心脏病专科医院，英国皇家布朗普顿医院是早使用生物可降解支架的医院，是生物可降解支架植入术成功率高的医院。医院在2005年即在临床使用生物可降解支架，是英国首个为病人使用生物可降解支架的的医疗中心，至今拥有七年的应用历史。作为英国好的心肺专科医院，同时也是英国大的心脏病和肺病专科医院，拥有1600多名员工，5个手术室和4个导管实验室。
海外医疗机构爱诺美康了解到，在核酸的检测上，几十年来，Southern和Northern印迹使用放射性同位素或荧光标记的探针进行了DNA和RNA的分析。然而，由于这些技术费时费力，并且需要大量的DNA/RNA，在临床实验室中用的越来越少。DNA/RNA的靶标和信号放大，是目前肿瘤分子诊断分析使用的两种主要技术。靶标放大的例子有PCR、连接酶链式反应，基于转录的扩增系统和链置换扩增，信号放大的例子有支链DNA，杂合捕获和入侵信号放大。原位杂交或显色原位杂交，是用于分子肿瘤学领域的另一个重要的技术，因为它是在肿瘤形态学的基础上进行的。
目前，常用的对临床标本进行分析的分子生物学技术是基于PCR和原位杂交的检测。此外，DNA/RNA微阵列，经过多年临床前实验验证，已开始被用于临床实践中。下一代测序（NGS)，作为一组新兴和强大的分子生物学工具，虽尚未被用于临床，但不久就会因其高精度、大规模处理能力和相对较低的成本而被应用于临床。
海外医疗机构爱诺美康了解到，聚合酶链式反应PCR，是用来扩增一段特异DNA的分子技术手段，以便分析遗传变异。一个基本的PCR需要以下几个成分：①一段DNA模板，也即用来扩增的目的序列；②一对引物，目的DNA序列的正义链和反义链分别互补的一段序列；③DNA聚合酶，适合的扩增温度在70丈左右；④dNTP，DNA合成过程需要的原料；⑤适合DNA聚合反应的缓冲液。
PCR反应通常在热循环仪中，以25~504反应体积进行热循环仪即PCR仪。市售的来自不同制造商的各种PCR仪器可见是临床实验室常用的。DNA模板上，通常引物的退火温度比引物溶解温度低3~5尤；③延伸步骤通常是在72~75丈，对大多数用于合成新DNA的DNA聚合酶都适合的温度范围；④后一个延伸循环步骤，通常是72丈10min，确保单链DNA能够完全延伸；⑤后一个短暂保存循环通常在4~15。
PCR产物也叫做扩增子，通常通过电泳、杂交、酶切以及测序来进一步检测，DNA电泳检测根据DNA片段的大小通过一定的黏性介质来分离，例如琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶。琼脂糖通常用来分离较大片段的DNA分子，而聚丙烯酰胺凝胶用来分离较短DNA片段或需要得到更高分辨率。
热循环仪器在反应的每个步骤中需要对反应管进行加热和降温。典型步骤如下：①DNA变性步骤通常在94~98，20~30s使得DNA变成单链；②50〜65T退火20〜40秒使得引物结合到单链。凝胶电泳结束后，DNA片段用一种荧光染料染色，例如溴化乙啶（EB)，然后在紫外灯下成像。
毛细管电泳用310/3100可以达到更高的分辨率，可以检测到小3个碱基的差异。海外医疗机构爱诺美康了解到，通过毛细管凝胶电泳分析扩增子，通常需要预先对引物用荧光染料标记。扩增子还可以通过与探针杂交检测，例如斑点杂交。为了检测点突变，扩增子可以通过内切酶酶切，因为点突变通常会造成 增加或改变一个酶切位点。
